高通量基因测序样本预处理方法第1部分：动物组织样本预处理

高通量基因测序样本预处理方法第1部分：动物组织样本预处理

国家标准 GB/33681.1一2017 高通量基因测序样本预处理方法 第1部分:动物组织样本预处理 Methodstopreparesamplesforhigh-throughputgenesequeneing Part1:Preparingsamplesofanimaltissues 2017-05-12发布 2017-12-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB;/T33681.1一2017 前 言 GB/T33681《高通量基因测序样本预处理方法》分为3个部分 第1部分动物组织样本预处理; 第2部分植物组织样本预处理; 第3部分微生物组织样本预处理 本部分为GB/T33681的第1部分 本部分按照GB/T1.l一2009给出的规则起草 本部分由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口 本部分起草单位:深圳华因康基因科技有限公司、深圳市华因康高通量生物技术研究院、广州康听 瑞基因健康科技有限公司、武汉康听瑞基因健康科技有限公司测试技术研究院、上海交通大学医 学院附属瑞金医院、国家人类基因组南方研究中心,中山大学肿瘤防治中心 本部分主要起草人;盛司潼,谭辉彪、李花、曾祷、杨杰斌,周李华、张俊、王升跃、陈功
GB;/T33681.1一2017 高通量基因测序样本预处理方法 第1部分:动物组织样本预处理 范围 GB/T3368的本部分规定了高通量基因测序技术中对待检的动物组织样本进行预处理的技术 要求 本部分适用于高通量基因测序过程中对待检的动物组织样本的预处理 本部分适用于血液、表皮拭子样本,新鲜动物组织样本(肌肉、脏器、毛发、骨骼)、甲醛固定动物组织 样本、石蜡包埋动物组织样本 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件 凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T26798单光束紫外可见光光度计 GB/T26813双光束紫外可见分光光度计 GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求 GB/T30989高通量基因测序技术规程 JG646移液器 YY0569 l级生物安全柜 YY/T0657医用离心机 医疗机构临床基因扩增管理办法卫生部2010年 AsTME1342用冷冻、冷冻干燥和低温养护法保存细菌、真菌、原生生物、病毒、遗传要素以及动 物和植物组织的标准实施规程(Standardpraeticeforpreservationbyfreezing，freeze-drying，andlow temperaturemaintenanceofbacteria，fungi，protista，viruses，geneticelements，andanimalandplant tissues 术语和定义 GB/T30989界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3.1 动物组织样本animaltissesample 提供DNA或RNA的用于构建测序文库的动物组织材料 3.2 接头 adapter -段人工合成的长度较短的能与平末端或黏性末端匹配(连接)的DNA片段
GB/T33681.1一2017 3.3 待测文库ibrarytobetested 由两端连有已知的特定接头,中间为未知序列的核酸片段组成的核酸分子的集合 3.4 sammpletobetested 待检样本 待测文库经单分子扩增后,固定在载体上的产物,可直接用于上机测序 3.5 动物组织样本预处理animaltissuesaplepretreatment 通过一系列实验步骤将动物组织样本处理成可直接用于基因测序的待检样本的过程,该过程是从 核酸的提取到待检样本的获得 3.6 前处理流程forwardlflow 材料和(或)样本的操作原则,用于确保实验室样本,原材料和包括DNA扩增产物在内的经过处理 的待检样本在整个实验过程中保持自然分离状态 3.7 monomoleeularamplification 单分子扩增 以单分子核酸为模板进行核酸扩增,形成单一类型分子簇的过程 缩略语 下列缩略语适用于本文件 DEPC;焦磷酸二乙酯(DiethyPyrocarbonate DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid DNase;脱氧核糖核酸酶(Deoxyribonuclease) NTPs:四种脱氧核苷酸(Deoxy-ribonucleotideTriphosphate) EPCR;乳液聚合酶链式反应(EmlsionPoymeraseChainReaetiom) ChainReaction PCR:聚合酶链式反应(Polymerase RNA;核糖核酸(RibonucleicAcid RNase:核糖核酸酶(RNaseRibonuclease TE:含乙二胺四乙酸的三胫甲基氨基甲烧缓冲液(Tris-EDTABufferSolution) 5 总则 5.1 一般性要求 动物组织样本预处理的目的是制备可直接用于高通量基因测序的待检样本,从而分析动物组织样 本的基因序列 动物组织样本预处理方法流程分为核酸的提取和待检样本的制备,其中待检样本的制 备包括片段化处理、接头连接以及单分子扩增 5.2核酸的提取 核酸提取是用物理、化学或生物酶的方法,释放动物组织样本中的核酸并对它进行纯化,充分去除 动物组织样本中的蛋白质,脂类等PCR抑制剂以及提取核酸时加人的试剂,保证核酸的质量和浓度的 稳定,以保证PCR反应的可重复性,所提取的核酸应是能满足下游分析要求的优质模板 常用的核酸 提取方法参见附录A
GB;/T33681.1一2017 5.3待检样本的制备 用物理、化学或生物酶的方法将提取出来的核酸(DNA、cDNA或RNA)剪切成一系列长度不同的 片段,回收目标长度的片段;在核酸片段的两端连上接头,制备成由两端连有已知的特定接头,中间为未 知序列的核酸片段组成的核酸分子的集合即待测文库 以待测文库中的核酸分子为模板进行扩增,最 终获得待检样本 待检样本的质量评估参见附录B 实验室要求 实验室的环境与设施应符合G8T205的规定 为了有效防止核酸污染,实验室宜根据预处理步骤设置不同的工作区域,所有实验操作宜在规定的 区域进行,动物组织样本的预处理应按照预处理步骤的先后顺序进行,严格遵循“前处理流程” 具体要 求应遵循附录C中的规定 主要仪器与设备 7.1超低温冰箱 温度调节范围在一10C一90C之间 7.2PCR仪 温度设置范围在099C之间;温控模块的实际温度与预设温度的差值的绝对值小于0.5C; 升降温速度大于等于3C/s 7.3生物安全柜 应符合YY0569的要求 7.4离心机 应符合YY/T0657的要求 7.5移液器 应符合JJG646的要求 7.6核酸测定仪 能满足核酸测定要求的仪器 宜采用紫外分光光度计,紫外分光光度计应符合GB/T26798或GB/T26813的要求 试验步骤 8.1核酸制备 8.1.1样本的前处理 根据样本类型的不同,样本的前处理可按下列方式进行处理 血液、表皮拭子样本可直接按8.1.2的要求进行核酸提取;
GB/T33681.1一2017 -新鲜动物组织样本应通过物理和/或化学的方法,将新鲜的动物组织处理成粉末或匀浆,悬浮 在生理盐水或磷酸缓冲液中,振荡混匀以备用: 甲醛固定动物组织样本应先脱醛,然后再通过物理和/或化学的方法,将待检样本处理成粉末 或匀浆,悬浮在生理盐水或磷酸缓冲液中,振荡混匀以备用 石蜡包埋动物组织样本应先脱蜡,然后再通过物理和/或化学的方法,将石蜡包埋动物组织处 理成粉末或匀浆,悬浮在生理盐水或磷酸缓冲液中,振荡混匀以备用 注:含自溶酶的动物组织样本,例如海参,需经过超高压处理灭活自溶酶以后再按新鲜动物组织样本进行处理 8.1.2核酸的提取 将动物组织样本中的核酸提取出来,充分去除动物组织样本中的蛋白质脂类、多糖等杂质 经纯 化后的核酸应能满足后续的分析要求 常用的核酸提取方法有酚-氯仿提取法、浓盐法、水抽提法,阴离 子去污剂法等 常用核酸的提取方法具体操作参见附录A 8.2待检样本的制备 8.2.1片段化处理 通过酶切、超声波或其他手段将提取出来的核酸分子切割成一系列长度不同的片段,回收目标长度 的片段 常用酶切法的具体操作参见附录D 8.2.2接头连接 在核酸片段的两端连上接头,制备成由两端连有已知的特定接头,中间为未知序列的核酸片段组成 的待测文库 利用只与两端接头序列匹配的引物进行扩增验证,应能得到预期大小的片段 8.2.3单分子扩增 以待测文库中的核酸分子为模板进行扩增,最终获得待检样本 单分子扩增的方法宜采用乳液 PCR或桥式PCR 常用的乳液PCR的具体操作参见附录E 质量评估 核酸提取及待测文库制备的质量评估的常用方法参见附录B
GB;/T33681.1一2017 附 录 A 资料性附录 核酸的提取方法 A.1试剂 总RNA抽提试剂(TRlzol、氯仿、无水乙醇、含10%乙醇的0.1mol/1柠檬酸钠、75%乙醇、TE、 异丙醇、,DEPC处理水 A.2设备 研磨杵、漩涡振荡器、高速离心机、冷冻离心机、移液器 A.3提取方法 A.3.1DNA的提取 A.3.1.1将动物组织样本与TRIzol混合,用研磨杵研磨 取50mg100mg组织加人1mLTRIzol,样本体积不能超过TRlzol的10% 匀浆后于15C~ 30C条件下放置5min,保证核蛋白复合体完全分离 注:如果匀浆出现大量沉淀,可先离心取上清液,再进行后续操作 ？ A.3.1.2往匀浆中加人 mL氯仿,盖好样本盖,常温剧烈摇动15s后放置5min " A.3.134C12000r/min离心10min, ,弃除上清液,往沉淀物中加人0.3ml无水乙醇,混匀后置于 室温2min3min C2000r/min离心5nmin,弃除上清液,用含10%乙醇的0.1mol/1柠檬酸钠洗涤DNA沉 不 A.3.1.4 淀,加人1mL柠檬酸钠,室温放置30min,4C12000r/min离心5min,弃上清,重复一次 min~20min， A.3.1.5再用1.5ml2 2ml的75%乙醉洗涤DNA沉淀,室温放置101 ,不时颠倒混合 A.3.1.64C,2000r/min离心5min，弃上清 A.3.1.7将DNA沉淀室温放置5nmin15min,晾干 用30l100ALTE(55C一65C预热)浴 解DNA 若提取的DNA中有胶状不溶物,可用大于12000r/min的转速离心10min除去 A.3.2RNA的提取 A.3.2.1取新鲜动物组织0.1g0,2g置于组织匀浆器中,加人1mL预冷的Trizol液,在冰浴中迅速 匀浆15s~ -30s,充分研碎组织 A.3.2.2然后将细胞悬浮液吸人另一1.5ml的离心管中,于室温下静置5mina A.3.2.3往离心管中加人200L氧仿,剧烈振摇15使混合物充分混匀后,室温静置3min. A.3.2.44C,10000r/min离心15min 将上层无色水相转移到另一离心管中,加人500异丙醇 室温静置10min. A.3.2.54,10000r/min离心l0min 弃除上清液,用1mL.75%乙醉洗涤RNA沉淀物 A.3.2.64C,7500r/min离心5min 弃除上清液,将RNA沉淀物置于室温下干燥15min. 向沉淀物中加人200ALDEPC处理水,溶解沉淀物,于一20C保存备用 A.3.2.7
GB/T33681.1一2017 附录 B 资料性附录) 质量评 价 B.1核酸提取的质量 B.1.1DA提取的质量 采用紫外分光光度法 所测得的OD260nm/OD280nm值应在1.7一2.0范围内 若OD260nm/OD280nm值低于1.7 说明提取的DNA中有蛋白质等杂质,应做进一步的分离纯化;若OD260nm/OD280nm值高于2.0. 则表明提取的DNA可能有RNA污染 B.1.2RNA提取的质量 B.1.2.1紫外分光光度法 所测得的OD260nm/OD280nm值应在1.7~2.0范围内 若OD260nm/OD280nm值低于1.7， 说明提取的RNA中有蛋白质等杂质,应做进一步的分离纯化;若OD260 nm/OD280nm值高于2.0. 表明提取的DNA中有盐,呱、糖等杂质,可用LiCL选择沉淀RNA以除去杂质 B.1.2.2琼脂糖凝胶甲醛变性电泳检测法 RNA样本的电泳结果可见清晰的28S、18S及5S小分子RNA条带,表明提取的RNA样本完整 性好 B.2 待测文库的质量 根据待测文库中核酸片段的两端接头的已知序列设计特异性扩增引物对待测文库的片段进行扩 增,所得产物大小应在预设范围内 B.3单分子扩增产物的质量 单分子扩增产物应能满足所选用高通量基因测序仪厂 家的质量要求
GB;/T33681.1一2017 C 附录 规范性附录) 实验室要求 C.1 -般要求 C.1.1 设施和环境要求 用于高通量基因测序样本预处理的实验室,动物组织样本应按照预处理步骤的先后顺序进行,严格 遵循“前处理流程”,有条件的宜在所分隔的各工作区域设置缓冲间,缓冲间的压力为负压(或上设抽风 装置),与其相连的工作间为正压,工作间与缓冲间之间宜安装磁性连锁装置 受实验场所限制而无条 件设置缓冲间的实验室,在对检测区域进行功能划分后,应根据A.2中的规定设置实验室的压力 非 实验人员不应进人各实验工作区 不同功能的高通量基因测序样本预处理工作区应是分隔独立的工作室,并有明显的标志,各区间不 能直通 各区之间如果是紧密相连,需安装物品传递舱 每个工作区域的顶部应安装紫外灯,紫外灯的波长为254nm,每20nm安装一支40w的紫外灯， 灯与地面的距离为2.0m士0.1nm c.1.2工作顺序 所有实验操作宜在规定的区域进行,动物组织样本的流动应遵照预处理流程的顺序,严格按单一方 向进行 C.2实验室工作区域的设置及要求 C.2.1 核酸检验区 C.2.1.1试剂贮存区 C.2.1.1.1 主要功能 原装试剂和配制试剂的贮存,所有试剂的分装与贮存 c.2.1.1.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的试剂贮存区,工作区域为正压 c.2.1.1.3注意事项 当试剂经质检合格后,应将其分装贮存备用,贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所 需的扩增反应数决定 用于扩增的试剂应冰冻贮存,避免反复冻融使用,冻融后置于4C保存,且4C 存放时间不应超过一周 c.2.1.2试剂配制区 c.2.1.2.1主要功能 用于所有试剂的配制与准备
GB/T33681.1一2017 c.2.1.2.2工作区域压力要求 未设缓冲间的试剂配制准备区域,工作区域可为正压或负压,可安装排风系统,视具体配制的试剂 而定 C.2.1.2.3注意事项 此区域是用于试剂配制的区域,应视所配制的试剂决定工作区域的分配,配制试剂所用的器具应在 使用前进行清洗,必要时加以消毒;不同试剂的配制防止受到交叉污染 C.2.1.3待检样本的制备区 C.2.1.3.1主要功能 实验室样品的处理以及符合测序要求的待检样本的制备 c.2.1.3.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的样品制备区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统 C.2.1.3.3注意事项 此区应远离其他实验操作区;粉碎样品时的器皿应单独使用,所用的器具在使用前应经过彻底清洗 并高压消毒,防止交叉诃染,称取的调试样品应加盖后再移至样品核酸制备区 C.2.1.4扩增区 C.2.1.4.1主要功能 PCR扩增反应体系的配制和模板的加人,核酸扩增 C.2.1.4.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的扩增区,工作区域为负压或减压,可安装排风系统 c.2.1.4.3注意事项 严格限制无关人员出人并减少在本区内走动;加样应在超净工作台(生物安全柜)内进行,超净工作 台的气流方向宜选择垂流式 C.2.1.5质检区 c.2.1.5.1主要功能 试剂配制结果以及扩增产物的定性与定量测定 C.2.1.5.2工作区域的压力要求 未设缓冲间的扩增产物区,工作区域为负压或减压,应安装排风系统 C.2.1.5.3注意事项 此区是最主要的扩增产物污染来源,应远离其他实验操作区;推荐使用荧光显微镜对试剂配制结果
GB;/T33681.1一2017 进行定性检测,推荐使用实时荧光定量PCR方法对扩增产物进行定量检测 注:若实验仅采用全自动扩增检测仪(如实时荧光定量PCR仪),可将扩增区与质检区合并为一个区 C.2.2其他区域 可设置洗涤消毒室洗涤、消毒、制备纯水和/或双蒸水、制冰等、高速/超高速离心机室、低温/超低 温冰箱室等 C3实验室质量控制和质量保证 C.3.1 人员 实验室的人员应符合GB/T27025的要求 实验操作人员应具备良好的分子生物学专业技术操作 规范 c3.2仪器设备 各实验区域应有专用的仪器设备-同一区域内的仪器设备,物品和工作服应有明显标记，瞪免与其 他区域的物品混用 仪器设备的校准应符合GB/T27025的要求 c.3.3试剂 c.3.3.1试剂要求 除另有规定外,所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂 试剂的 选购、验收、贮存应符合GB/T27025的要求 实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格 去离子水的电阻率应达到18.2mQ”cm. 商品试剂盒应注明到货日期,对所收到的试剂盒应按规定的贮存条件存放 对动物细胞组织的贮存与保管应符合AsTME1342的规定 C3.3.2试剂配制 实验室配制的试剂应在容器上标明试剂名称、浓度、配制时间、保存条件,失效日期及配制者姓名 所用试剂溶液宜大体积配制,并于0.l1MPa,121C,高压灭菌15min至20min,然后小体积分装 后保存;不宜高压灭菌的试剂应过滤(0.22Mm)除菌;PCR预混液、引物、探针应避免反复冻融;若冻融 后未用完的试剂应保存于4C,且保存时间不应超过一周 C.3.3.3试剂质量控制 实验室应确定关键试剂,并在使用前进行质量检测 关键试剂包括;核酸提取试剂,RNase,蛋白酶 K、阴性对照标准物质、阳性对照标准物质、Taq酶、各种限制性内切酶、T4连接酶、引物、探针 C.3.4防止污染 C3.4.1严格实验室分区 按A.2中的规定,对实验室进行功能分区,各区的工作服、实验用具和实验记录本应区分标记,不 能混用
GB/T33681.1一2017 C.3.4.2废弃物处理方式 参照GB/T19489实验室生物安全通用要求,以及《医疗机构临床基因扩增管理办法》附件《实验室 工作导则》中相关要求进行处理 0
GB;/T33681.1一2017 附 录 D 资料性附录 片段化处理 D.1总则 采用DNA限制性内切酶NlaW,Sau3AI等酶切DNA分子 根据所需核酸分子的大小设置酶浓度 梯度实验,根据实验需要选择合适的酶浓度进行大量酶切,该实验建议在冰上操作 D.2试剂 限制内切酶、乙二胺四乙酸(EDTA)、12%聚丙烯酰胺凝胶、聚丙烯酰胺凝胶回收试剂盒、苯酚、氯 仿、异戊醇、无水乙醇、75%乙醇、醋酸铵、TE D.3设备 电泳仪,水浴锅、高速离心机、移液器 D.4实验方法 D.4.1取lg104g核酸提取产物,加人限制内切酶缓冲液,在冰上混匀,于37C条件下酶切 20min 注，限制内切酶缓冲液的量按lU/4g核酸提取物计算 D.4.2加人EDTA终止反应,在12%PAGE,180V的条件下聚丙烯酰胺凝胶电泳约30min,回收目标 区间DNA片段 在紫外光照下切取目标区间的DNA片段 D.4.3 D.4.4回收DNA片段产物 将切取的凝胶转移至事先用7号针头在管底戳了1个~6个小孔的0.5mL离心管中,将 D.4.4.1 0.5mL离心管置于2.0mL离心管中,12500r/min离心破碎凝胶 D.4.4.2加人至少50ALPAGE凝胶回收液,回收液需没过PAGE凝胶 37C放置2h或4C过夜 注若总体积超过300L,宜分成两管,涡旋振荡混匀 D.4.4.3将凝胶及PAGE凝胶回收液转移至纯化柱中,12500r/min离心2min,将离心后的水相转移 至新的1.5mL的离心管中;用灭菌枪头将离心柱内的胶块轻轻捣松(注意不要碰到柱子的薄膜). 12500r/min再离心3min,直至胶块干燥为止 D.4.4.4 合并离心液,加人等体积的苯酚-氧仿-异戊醇(25;24:1)混合液,利用涡旋震荡仪振荡大约 0s,使溶液充分混匀 D.4.4.512500r/min室温离心2min,吸取上层水相至新1.5ml.离心管中 D.44.6往离心管中加人350L一400L 氯仿/异戊醇(24:1)混合液使用涡旋震荡仪振荡大约 0s,使溶液充分混匀 D.4.4.712000 r/min室温离心2min,吸取上层水相至新1.5ml离心管中 D.4.4.8加人1LGL100AL醋酸铵(10mol/L)和750"L经一20C预冷的浓度为100%的乙醉,混 1
GB/T33681.1一2017 合均匀,于一80C放置1h或-20C条件下过夜 D.4.4.9414000r/min离心15min,出现微量淡淡白色DNA沉淀,移除上清液 注:避免碰到白色沉淀 D.4.4.10用lml.75%乙醇(一20C预冷)洗涤沉淀,4C14000r/min离心5min,移除上清液 重复 该步骤一次 D.4.4.11打开离心管盖,在超净台中用轻风吹干沉淀(约20min) D.4.4.12加人20lL一40LTE溶解沉淀(大约5min),将产物置于一20C条件下保存 注上述聚丙烯酰胺凝胶DNA回收可采用市面上现售的同等功效试剂盒进行,具体方法步骤参见相应的说明书 12
GB;/T33681.1一2017 附录 E 资料性附录 单分子扩增 E.1试剂 PCR扩增试剂盒,水饱和乙隧 E.2设备 乳浊液制备仪,漩涡振荡器,真空干燥箱、PCR仪,电泳仪、移液器 E.3实验步骤 E.3.1制备水相 在25C条件下混合DNA、引物、热稳定酶、缓冲液、Mg=+,dNTPs和水 E.3.2配制乳液 在25C条件下将油相和水相按体积比为2.5:1的比例混合,利用乳浊制备仪将油相和水相的混 合物制备成乳液,最终乳液中应有10'10'个微球反应体系 E.3.3PCR扩增 将配置好的乳液分装到PCR管中,进行PCR扩增 E.3.4提取扩增产物 E.3.4.1PCR扩增结束后,往反应体系中加人等体积的水饱和乙酥,涡旋震荡;重复该步骤2次3次 E.3.4.2将反应液在25C条件下,13000r/min高速离心5min,弃除上层油相,保留水相;重复该步骤 2次一3次 E.3.4.3 合并水相,置于25真空干燥箱干燥5min,使剩余乙酥完全挥发 E.3.5检测扩增产物 采用2%的琼脂糖凝胶对扩增产物进行凝胶电泳,检测扩增产物是否与预期大小一致 13
GB/T33681.1一2017 考文献 参 GB/T19489一2008实验室生物安全通用要求 [1] [7 GB/T19495.1一2004转基因产品检测通用要求和定义 [时 GB/T19495.2一2004转基因产品检测实验室技术要求 [ GB/T25168一2010畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 [5]GB/T25170一2010畜禽基因组BAC文库构建与保存技术规程 [ SN/T2497.21一2010进出口危险化学品安全试验方法第21部分;琼脂糖凝胶电泳试验 [7]J.萨姆布鲁克,Dw.拉塞尔.分子克隆实验指南.3版.黄培堂,等,译.北京;科学出版社. [8]NakanoM.KomatsuJ,Matswuras,tal.singlemolecdlePCR usingwaterinoilemulsion [].JBiotechnol.2003.l02 :l117-124. Yamane.Invitromethodforthe erationofproteinlibraries [9SOhuchi,HNakano,and gene usingPCRamplificationof singleDNAmoleculeandcoupledtranseription/translation[] Nucleic AcidsRes，1998，2619):4339-4346. SehutzeT,RubelF,RepkowJ,etal Astreamlinedproocolforemulsionpolymerase 10门 chainreactionandsubsequentpurificationJ门.AnalBiochem,2011,410(1):155-157 14

高通量基因测序样本预处理方法第1部分：动物组织样本预处理GB/T33681.1-2017

随着生物学技术的不断发展，高通量基因测序已经成为研究生命科学的重要手段之一。然而，高通量基因测序的质量和准确性很大程度上取决于样本的预处理过程。本文介绍了高通量基因测序样本预处理方法第1部分：动物组织样本预处理GB/T33681.1-2017。 GB/T33681.1-2017是国家标准中规定的动物组织样本预处理方法，该方法从取样、保存、处理到DNA提取等环节都有详细描述。其中，关键步骤包括样本取样前的准备、组织取样、组织保存和DNA提取。 在进行样本取样前，需要对实验室条件、工具设备和试剂等进行检查和准备，以保证样品的纯度和完整性。组织取样时，要注意避免污染和氧化等可能影响DNA质量的因素。在组织保存过程中，需要选择合适的方法进行保存，并注意保存温度和时间等因素。在DNA提取环节，必须要遵循标准操作规程，以确保提取到高质量的DNA。 总之，GB/T33681.1-2017规定了动物组织样本预处理的详细步骤和要求，能够有效地保证高通量基因测序的样品质量和数据准确性。对于从事高通量基因测序研究的科研人员，掌握这些预处理方法非常重要。

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