GB/T33682-2017
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则
Generalmicroganismidentificationmethodwithwithmatrix-assistedlasterdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry
- 中国标准分类号（CCS）A40
- 国际标准分类号（ICS）07.080
- 实施日期2017-12-01
- 文件格式PDF
- 文本页数5页
- 文件大小414.73KB
以图片形式预览基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则
国家标准 GB/T33682一2017 基质辅助激光解析电离飞行时间 质谱鉴别微生物方法通则 Generalmieroganismidentifieationmethodwithmatrix-assistedilaser desorption/ionizationtimeoflightmassspeetrometry 2017-05-12发布 2017-12-01实施 国家质量监督检验检疫总局 发布 国家标准化管理委员会国家标准
GB/33682一2017 基质辅助激光解析电离飞行时间 质谱鉴别微生物方法通则 范围 本标准规定了基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物的方法通则
本标准适用于各类从事微生物相关检验工作实验室对样品中的微生物进行快速鉴定以及研究,可 鉴定微生物种属
规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的
凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件
GB4789.102016食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18204.3一2013公共场所卫生检验方法第3部分:空气微生物 GB19489实验室生物安全通用要求 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 全微生物蛋白质指纹图谱mierobialproteinfingerprinting 未经处理的微生物菌苔(如固体培养基上的菌落),直接涂于靶板上,待干燥后加上基质混合,全细 菌可溶性蛋白与基质形成共结晶体后通过真空飞行时间管获取不同质电荷比的蛋白分子质谱指纹 图谱
缩略语 下列缩略语适用于本文件
CHCA;a氮基-4羚基肉桂酸(a-Cyano-4-hydroxyeinnamicaeid) DHB:2,5-二羚基苯甲酸(2,5-dihydroxybenzoicaeid MALD[-TOFMS;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-AssistedLaserDesorption/Ioni- ationTimeofFlightMassSpeetrometry) 5 原理 常见微生物都由其区别于其他种类的特殊蛋白质组成,因而拥有独特的蛋白质指纹图谱,这是由物 种的遗传特性所决定的,受外界环境条件等影响较小 样品(来自痰,血、体液、拭子等临床样本及食品、化妆品、药品及环境等)经适当的处理,在固体培养
GB/T33682一2017 基上培养,分离出单个菌落后,直接点样至靶板并将其放人基质辅助激光电离解析飞行时间质谱 MALD-TOFMS)内,经离子化按照质量/电荷(m/:)比值大小分离,将采集的数据与微生物指纹图 谱库对照鉴定
6 试剂与标准品 除非有特殊说明,仅使用色谱纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水
6.1甲酸(HCOOH)
6.2乙晴(CH.CN). 6.3乙醇(CH,CH.oH)
6.4三氟乙酸(CF.COOH) 6.5磷酸盐缓冲液;pH7.2
氧基4羚基内桂脱(c;HNo.),光谱纯 6.6 6.72,5-二羚基苯甲酸(C,H,O,光谱纯
6.8血琼脂培养基;按照GB4789.10-2016中A.2的规定执行
6.9沙氏琼脂培养基;按照GB/T18204.3一2013中4.2.2.1的规定执行
6.10标准菌株ATcC8739大肠埃希氏菌(Escherichiacoli.
仪器与设备 7.1MALD1-TOFMS. 7.2二级生物安全柜
7.3恒温培养箱;36C士1C,25C士1C
7.4离心机12000r/min. 7.5旋涡混合器
7显微饭 77 微量移液器及枪头
7.8一次性或重复使用靶板 7.9 AL接种环
试验方法 8.1微生物的培养 8.1.1培养前处理 痰、血、体液、拭子等临床样本经采集后直接接种
其他固体样品需粉碎,加人无菌磷酸盐稀释液溶 解,液体样品可不经过溶解
8.1.2微生物培养 -般细菌划线接种血琼脂培养基,36C士1C培养24h士2h;酵母划线接种沙保弱葡萄糖琼脂培 养基,25C士1C培养2d3d;其他类型微生物,如霉菌、分枝杆菌和诺卡氏菌等,可参照相关标准中 规定的培养基和培养方法执行
GB/33682一2017 8.2样品处理点靶 8.2.1 一般细菌和酵母菌 鉴定细菌时,直接使用1AL接种环挑取单个菌落,点在样品靶板孔中,涂抹均匀并在室温自然晾 干
如果鉴定酵母,需要用微量移液器吸取0.5l.25%FA溶液(破坏细胞壁,使蛋白溶出)
用微量 移液器吸取1L基质溶液,与样品混合,自然晾干,形成结晶(基质可选择CHCA,DHB中的一种). 8.2.2霉菌 将无菌棉拭子在去离子水中沾湿后,从沙氏培养基上刮取1em'一2cem霉菌菌落,转移至装有 300L超纯水的2mL离心管中
向离心管中加人900L乙醉,用漩涡混合器混匀3s5s
混合后 用离心机在10000r/min下离心2min后去除上清液,置于室温干燥
加人40L
70%甲酸漩涡混合 3s一5s,之后再加人40ML乙晴漩涡混合3s~5s,用离心机在10000r/min离心2min后,用微量移 液器吸取1AL样品加在样品靶板孔中,待室温干燥后再加人1L基质溶液,在室温下自然晾干
8.3生物防护 所有标本,微生物培养物以及接种后的实验材料均应在符合GB19489规定的相应生物安全等级 的实验室条件下进行操作,并适当处置
8.4仪器条件 8.4.1仪器;MALDTOFMS. 8.4.2激光能量:每激光束能量1004,激光能量可从0%~100%范围调节
8.4.3质谱扫描范围;2000Da一20000Da
8.4.4微生物指纹图谐库.VMsPlusDatabase'或同等类型数据库
8.5质控菌株校准 将标准菌株ATCC8739大肠埃希氏菌转种至血琼脂培养基上36C士1笔培养24h士2h
每次检 测样品前推荐使用ATcC8739大肠埃希氏菌的11个特征峰校准飞行时间质谱
8.6鉴定 将样品靶板放人仪器内,设定合适的激光能量,质谱扫描范围等参数,开始质谱数据采集
数据采 集完成后,将经过处理的质谱数据自动/手动导人本地微生物指纹图谱库即微生物鉴定系统,并在鉴定 系统中鉴定结果
8.7结果判读 图谱数据经指纹图谱库运算后直接显示菌株的鉴定结果,并以颜色显示每个涂菌点位的鉴定结果 的置信水平
结果报告 参照微生物质谱鉴定系统的鉴定置信水平报告微生物鉴定结果
给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可
如果其他等效产品具有相同的效果,则 1 可使用这些等效的产品
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则GB/T33682-2017
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）是一种新型的微生物鉴别方法，已经被广泛应用于临床和实验室中。为了规范这一技术的应用，国家标准化管理委员会制定了《基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则GB/T33682-2017》标准，本文将对该标准进行介绍。 该标准主要包括了以下方面内容：样品处理、仪器操作、数据处理以及结果解释等。在样品处理环节，需要注意微生物的培养、取样和纯化等步骤，以保证样品的质量。仪器操作方面，需要掌握MALDI-TOF MS仪器的基本原理和使用方法，同时还需要注意相关操作规程。 在数据处理环节，需要进行谱图质量评估、峰识别和质量控制等步骤。至于结果解释，需要据此对微生物菌株进行鉴定分类，并与已知菌种比较，以得出准确的结果。 总之，《基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则GB/T33682-2017》标准是规范该技术应用的重要依据，实验人员应该按照标准中的要求进行操作，以保证结果的可靠性和准确性。这一标准的推广和应用，将有助于提高我国医学和生命科学领域中微生物鉴定和分析的水平。
